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金匮肾气丸对庆大霉素致聋豚鼠血清IL-2的影响_论文

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浙江中医杂志 2 0 1 5 年 9 月第 5 O卷第 9 期  金 匮 肾气 丸对 庆 大霉 素 致 聋 豚 鼠血 清 I L 一 2的影 响 *   赵 乌 兰  王 枫  浙 江 中 医药大 学   浙江 杭州 3 1 0 0 5 3   摘 要  目的 :探 讨补 肾方金 匮 肾气 丸 对庆 大霉 素 造 成 药 物性 耳 聋豚 鼠 血 清 I L 一 2的影 响 。 方 法 :将 6 O   只健康 豚 鼠分 为 6 组 :正常 组 、模 型组 、 阳性 对 照 组 、 高剂量 组 、 中剂 量 组 、低 剂量 组 ,每 组 1 0只 。   将 正 常组 除外 的豚 鼠腹腔 注射 庆 大霉素 l O O mg /( k g?d )制 作耳 聋 动 物模 型 ,治疗 组在 注射 庆 大 霉素  后 灌服金 匮 肾气丸水 煎 剂 ,实验 结 束后 豚 鼠 断 头 处死 ,采 血 分 离血 清 ,进 行 炎症 介 质 I L 一 2测 定 。结  果 :金 匮肾 气丸 高   中、低 剂 量 组 与 模 型 组 比 较 ,I L 一 2表 达 有 所 减 少, 差 异 有 统 计 学 意 义 ( P<  0 . 0 5 ) 。结 论 :金 匮 肾气丸可 以 降低 I L - 2表 达 ,从 而 降低 庆 大霉 素 的毒 性 ,对庆 大霉 素 所 致 耳 聋有 一  定 的 防治作 用。   关 键词  金 匮肾气丸  庆 大霉 素  聋豚 鼠  血 清 I L 一 2   实验研 究  金 匮 肾气 丸 源 自东汉 著 名 医家 张 仲景 所 著 《 金 匮  要略》 ,为补 肾之 祖 方 。本 文 通 过 金 匮 肾气 丸 对 庆 大  1 . 3 . 2 造 模 和方 法 :正 常 组 普 通 饲 料 喂养 ;其 他 各  组庆 大霉 素注射 制作 耳 聋模 型 。除正 常 组 外各 组 豚 鼠  每 日腹腔 注射 庆大 霉 素 l O O mg / k g ,连 续 2 1天 ,造 成  药物性 耳 聋模 型 。金 匮 肾气 丸 治 疗 组 按 高 、 中、低 3   个剂 量组 ,给 药量 分 别 为 2 0 . 3 g / k g / d 、1 3 . 5 g / k g / d 、   霉 素造 成 药 物 性 耳 聋 豚 鼠 血 清 白细 胞 介 素一 2( I L 一 2 )   影 响的 实验研 究 ,探讨 其 防治耳 聋机 理 。   1 材 料 和 方 法  1 . 1   实验 动 物 :以无 耳 疾 、健 康 豚 鼠 6 O只 ,体 重  6 . 0 8 g / k g / d( 相 当于成 人 公 斤 体 重用 药 量 的 1 5 、1 0 、   2 3 0  ̄2 6 0克 ,雌雄 搭配 ,为研 究对 象 ,由浙 江 中医药  大学 实 验动 物 中心提 供 。所 有 豚 鼠在 相 同条 件 下 ,雌  雄分 笼 ,标准 饲料 饲养 于 浙 江 中医 药 大学 动 物 实验 中  心。   5 倍) ,以上 述 剂量 1次/ 日,灌 胃给 药 。 阳性 治 疗 组  予 以弥可保 3 0 0 /  ̄ g / k g / d( 相 当 于 成 人 公 斤 体 重 用 药  量的 1 O倍 ,药 物 含 量 2 2 . 2 t L g / m1 )灌 胃给 药 。正 常  对照组 动 物 自由饮水 和进 食 。实 验结 束 后 ,处 死 所 有  豚 鼠 ,采 血分离 血 清 ,取 双侧 耳蜗 组织 。   1 . 3 ~ 炎 症介质 ( I L 一 2 )测 定 :酶联免 疫 法 ( E L I S A   1 . 2   主要 药 品和 试 剂 ;I L 一 2夹 心 法 酶 联 免 疫 吸 附 测  定试 剂 盒 ( 昊 天 生 物 技 术 有 限 公 司 提 供 ,产 品 编 号  4 R O l 1 ) ;弥 可保 片 ( 卫 材药业 有 限公 司制造 ,批 准文  号 :H2 0 0 3 0 8 1 2 ) ;抗 体 稀释液 ( 上 海长 岛生 物技 术有  限公 司 ) ;金 匮 肾 气 丸水 煎剂 按 《 金 匮 要 略 》 的组 成  与剂 量 ( 干地黄 3 0 g ,山药 2 0 g ,山茱 萸 1 5 g ,牡 丹  法) ,Ve c t o r 公 司的酶 标 仪 是 典 型 的夹 心 法 酶 联 免疫  吸附测 定 试 剂 盒 ( E n z y me   L i n k e d — I mmu n o — S o r b e n t   As s a y ,E uS A) 。预先 包被 的抗 体 为 单 克 隆抗 体 。检  测 相 抗 体 为 多 克 隆 抗 体 ,经 生 物 素 ( b i o t i n )标记 。   样 品和生物 素标 记抗 体先 后 加 人 酶标 板 孑 L 反应 后 ,用  磷 酸盐 缓 冲液 ( P B S ) 洗 涤 。随后 加 入 过 氧 化 物 酶标  记 的亲和 素反应 ;经 过 P B S的彻底 洗涤 后用底 物 四 甲   基 联苯 胺 ( TMB)显 色 。TMB在 过 氧 化 物 酶 的催 化  下转化 成 蓝 色 ,并 在 酸 的 作 用 下 转 化 成 最 终 的黄 色 。   颜 色 的深浅 和样 品 中的 I L - 2呈正 相关 。   1 . 3 . 4 统计 学方 法 :计量 资料 用均 数 ±标 准 差 ( z±  s )表示 ,用 S P S S 1 7 . 0软件 统计包 对各 组 数据 进 行 统  皮 、茯苓 、泽 泻 各 1 0 g ,桂 枝 、制 附 子 各 5 g ) ,本 校  制剂 室制 成水 煎剂 ,生 药含 量 1 . 0 g / ml 。   1 . 3 方法 :分 述 如下 。   1 . 3 . 1   动物分 组 :6


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